Seu genoma está repetitivo?

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Seu genoma está repetitivo?

 

Você sabia que os elementos repetitivos móveis foram descobertos por uma mulher na década de 40?

 

A botânica Barbara McClintock, foi a única mulher ganhadora do Prêmio Nobel em Fisiologia e Medicina até hoje a receber a honraria sozinha. Fantástico, não é? Os elementos repetitivos estão presentes em todos os organismos (com exceções) e são também essenciais em tecnologias para sequenciamento NGS - quem iria imaginar o impacto dos estudos de uma única mulher no século passado? 

 

Passo a passo preparo de biblioteca NGS: 

 

Complexo [transposase + transposon]: a enzima transposase se conjuga a um transposon livre, que contém o sítio de reconhecimento da enzima e uma sequência adaptadora.

 

Tagmentação: Na presença da molécula alvo (DNA de dupla fita), o processo de transposição cliva e transfere o transposon - incluindo a sequência adaptadora - na ponta 5' da molécula que acaba de ser fragmentada. No conjunto, a tagmentação resulta em diversos fragmentos com uma mesma sequência nas pontas, e portanto, facilmente amplificável. 

 

Amplificação: Uma reação de PCR, de poucos ciclos, adiciona adaptadores compatíveis com a flowcell e, opcionalmente,indexes para multiplexar a corrida. Pronto! Os fragmentos passam por uma reação de limpeza e estão prontos para o sequenciamento.

 

Para saber mais:

Sobre Barbara McClintock

Elementos de transposição = junk DNA? Acho que não... Faça um quiz

Sobre transposases na tagmentação:  

Mind the gap - Por que é importante fechar os genomas?

Elementos de transposição e Procariotos e Eucariotos:

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19052325 

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19396957 

 

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Última atualização: Nov. 4, 2020, 3:48 p.m.

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